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离心机的原理和使用
作者:亚博  来源:亚博网址多少  时间:2019-09-26 17:34  点击:

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  离心机的原理和使用 ? ? ? ? 实验目的:了解离心机的原理和使用方法 实验原理:借助离心机旋转所产生的离心 力,使不同大小和不同密度的物质分离 用途:细胞的收集、细胞碎片和沉淀的分 离等常用离心分离 超速离心技术已成为分离、纯化、鉴别和 各种生物大分子的重要手段之一 2019/2/2 1 2019/2/2 2 一 离心机的种类与用途 ? 速度: ? ? ? 常速(低速) 8000r/min 高速 10000~30000r/min 超速 30000r/min 固定角转子(Eixed-Angle-Rotor) ? ? 转子: ? ? 主要用于分离沉降速度有明显差异的颗粒样品 主要用于样品作密度梯度离心 甩平转子(Siwing-Bucket-Rotor) ? 2019/2/2 3 常速离心机 ? ? ? 1 常速离心机 8000r/min, R.C.F1*104g 用途:分离细胞、细胞碎片、培养基残 渣及粗结晶等较大颗粒 2019/2/2 4 高速离心机 ? ? ? ? 2高速离心机 1*104g ~ 2.5*104 r/min , R.C.F 1*104g~105g 用途:分离各种沉淀物、细胞碎片及较 大的细胞器等 高速冷冻离心机 2019/2/2 5 超速离心机 ? ? ? ? ? 2.5*104g~8*104 r/min ,R.C.F 5*105g或更高 结构:离心管帽、冷冻装置和温控系统、真 空系统、安全保护系统、制动系统、指示仪 表等。 按用途分: 制备用超速离心机:分离纯化生物大分子、 细胞器和病毒等 分析用超速离心机:测定样品纯度(根据紫 外吸收率或折光率等判断)、沉降系数、相 对分子量 6 2019/2/2 ? 沉降系数 S :单位离心力作用下粒子的 沉降速度,以 Svedberg 表示,简称 S 。 1S=1*10-13s 2019/2/2 7 ?沉降系数S与分子量M有对应关系,测 出离心机转速、离心时间和粒子移动距 离,可求出S,再得到M 2019/2/2 8 二 离心方法的选择 ? ? 对于常速和高速离心机,由于所分离的 颗粒大小和密度相差较大,只要选择好 离心速度和时间,就能达到分离效果。 超速离心的离心方法:差速离心、密度 梯度离心和等密度梯度离心 2019/2/2 9 ? ? 1 差速离心 采用不同的离心速度和离心时间,使沉 降速度不同的颗粒分批分离的方法。主 要用于分离大小和密度差异较大的颗粒。 2019/2/2 10 2 密度梯度离心 ? ? ? ? 样品在密度梯度介质中进行离心,使沉 降系数比较接近的物质得以分离的一种 区带分离方法。 密度梯度系统:梯度介质有足够大的溶 解度,不与分离组分反应,不会引起分 离组分的凝集、变性或失活。 常用介质:蔗糖、甘油等。 样品铺在密度梯度溶液表面,离心后形 成若干条界面清楚的不连续区带。 2019/2/2 11 2019/2/2 12 3 等密度离心 ? ? 当欲分离的不同颗粒的密度范围在离心 介质的密度梯度范围内时,不同浮力密 度的物质颗粒在离心力作用下一直移动 到与各自浮力密度相等的位置(等密度 点),形成区带。 等密度离心常用的介质:铯盐,如CsCl, Cs2SO4,CsBr 13 2019/2/2 三 离心条件的确定 ? ? ? ? ? 离心力(转速) 离心时间 温度 pH值 线 思考题 ? ? ? ? 1 名词解释 离心分离 相对离心力 沉降系数 2 按离心机转速分,离心机有哪些种类? 各自的适用范围是什么? 3 超速离心方法有哪些? 4 离心操作应注意控制哪些条件?离心 转速和沉降时间有何关系? 15 2019/2/2

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